針對貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞，常用的細(xì)胞固定方法確實(shí)存在著顯著的差異，這些差異源自于細(xì)胞生長特性的不同以及后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求的多樣性。
對于貼壁細(xì)胞而言，由于其緊密地附著于培養(yǎng)皿或載玻片表面，因此常采用原位固定的方法。這種方法通常涉及將細(xì)胞培養(yǎng)物暴露于適當(dāng)濃度的固定劑中，如甲醛戊二醛或甲醇等，這些固定劑能夠有效地穿透細(xì)胞膜，迅速穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和形態(tài)。固定過程需嚴(yán)格控制時(shí)間，以避免過度固定導(dǎo)致的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞。通過原位固定，貼壁細(xì)胞得以在保持其原位狀態(tài)的同時(shí)，獲得良好的形態(tài)學(xué)保存，為后續(xù)染色、顯微鏡觀察及分子生物學(xué)分析等實(shí)驗(yàn)步驟奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
下面將分別介紹這兩種類型細(xì)胞的固定方法：
（1）貼壁細(xì)胞的固定方法：
貼壁細(xì)胞是在培養(yǎng)皿底部附著生長的細(xì)胞，固定的目的是保持細(xì)胞形態(tài)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性。常用的貼壁細(xì)胞固定方法有：
? 甲醛固定法：將細(xì)胞培養(yǎng)液倒掉，用4%甲醛進(jìn)行固定。通常在室溫下固定10-30分鐘，然后洗滌掉甲醛。
? 乙醛固定法：使用2-4%乙醛溶液進(jìn)行固定，固定時(shí)間和溫度根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和細(xì)胞類型而定。
? 冰醋酸固定法：將冷凍的乙醇或冰醋酸溶液直接加到培養(yǎng)皿中，使細(xì)胞迅速固定。
在固定之后，可以使用PBS洗滌細(xì)胞，以去除固定劑和其他污染物。固定的細(xì)胞可以用于后續(xù)的免疫染色或其他細(xì)胞分析。
（2）懸浮細(xì)胞的固定方法：
懸浮細(xì)胞是在培養(yǎng)液中自由懸浮生長的細(xì)胞，固定的目的是保持細(xì)胞的形態(tài)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，以便進(jìn)行后續(xù)的免疫染色或其他細(xì)胞分析。常用的懸浮細(xì)胞固定方法有：
? 乙醇固定法：將細(xì)胞用70%至100%濃度的乙醇進(jìn)行固定。通常在-20°C或4°C下固定20-30分鐘。
? 甲醛固定法：將細(xì)胞用4%甲醛進(jìn)行固定。固定時(shí)間和溫度可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行調(diào)整。
? 醋酸乙酯固定法：將細(xì)胞用醋酸乙酯固定，通常需要在室溫下固定一定的時(shí)間，然后用PBS洗滌細(xì)胞。
在固定懸浮細(xì)胞后，可以用PBS洗滌去除固定劑，并進(jìn)行后續(xù)的染色或分析。
相比之下，懸浮細(xì)胞由于缺乏附著點(diǎn)，其固定方法則需更加靈活多變。一種常見做法是使用離心技術(shù)將懸浮細(xì)胞沉淀下來，隨后以類似貼壁細(xì)胞的方式進(jìn)行固定。此外，還可采用直接固定法，即將懸浮細(xì)胞與固定劑混合后，在溫和攪拌下使細(xì)胞均勻接觸固定劑。為確保固定效果，有時(shí)還需結(jié)合使用細(xì)胞濾網(wǎng)或離心洗滌步驟，以去除多余的固定劑并減少背景干擾。通過這些精細(xì)的操作流程，懸浮細(xì)胞同樣能夠獲得滿意的固定效果，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的細(xì)胞樣本。
